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毛细管气相色谱法同时测定埃索美拉唑镁原料药

埃索美拉唑镁 (Esomeprazole Magnesium) 商品名为耐信 (Nexium) , 是奥美拉唑的 (S) -型异构体, 是全球首个治疗胃溃疡方面的手性质子泵抑制剂 (PPI) , 通过特异性抑制胃壁细胞质子泵减少胃酸分泌[1], 其主要用于治疗胃食管反流病、幽门螺杆菌 (Hp) 阳性的消化性溃疡等疾病;其特点为口服后的首关效应少, 生物利用度和血药浓度较奥美拉唑或其 (R) -型异构体高。研究表明, 埃索美拉唑镁疗效明显优于奥美拉唑、兰索拉唑、雷贝拉唑以及泮托拉唑等[2]。埃索美拉唑镁在合成工艺中使用了乙醇、乙酸乙酯、异丙苯、甲醇、甲苯、2-苯基-2-丙醇、二氯甲烷和乙腈等有机溶剂, 为有效控制该原料药质量, 保证用药安全, 必须对上述有机溶剂残留量进行有效控制。鉴于此, 笔者参考相关文献[3,4,5], 采用毛细管气相色谱法建立了同时测定埃索美拉唑镁原料药中上述8种有机溶剂残留量的方法, 以期为该原料的质量控制提供依据。

1 材料

1.1 仪器

气相色谱仪, 包括自动进样器、氢火焰离子化检测器、色谱工作站 (美国Agilent公司) ;XS105 Dual Range型电子分析天平 (瑞士Mettler-Toledo公司) 。

1.2 药品与试剂

埃索美拉唑镁原料药[石药集团中奇制药技术 (石家庄) 有限公司, 批号:20160101、20160102、20160103];乙醇对照品 (天津市光复科技发展有限公司, 批号:20161110) 、乙酸乙酯对照品 (国药集团化学试剂有限公司, 批号:20140929) 、异丙苯对照品 (上海阿拉丁生化科技股份有限公司, 批号:G1530023) 、甲醇对照品 (ACS Chemicals Supply, 批号:63Y1706TE) 、甲苯对照品 (天津市致远化学试剂有限公司, 批号:20161019) 、2-苯基-2-丙醇对照品[萨恩化学技术 (上海) 有限公司, 批号:EA180093]、二氯甲烷对照品 (天津市致远化学试剂有限公司, 批号:20161110) 、乙腈对照品 (RCI Labscan Limited, 批号:16010307) , 纯度均>97%;二甲基亚砜为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:HP-1 (60 m×0.53 mm, 5.00μm) ;升温程序:初始温度为40℃, 保持6 min, 以20℃/min升温至160℃, 保持3 min, 以20℃/min升温至210℃, 保持5min;进样口温度:220℃;检测器:氢火焰离子化检测器;检测器温度:250℃;载气:氮气;流速:4.0 m L/min;分流比:10∶1;进样量:1μL。

2.2 溶液的制备

2.2.1 混合对照品溶液

精密称取乙醇对照品500 mg、乙酸乙酯对照品500 mg、异丙苯对照品500 mg、甲醇对照品300 mg、甲苯对照品89 mg、2-苯基-2-丙醇对照品89 mg、二氯甲烷对照品60 mg、乙腈对照品41 mg, 置于同一100 m L量瓶中, 加二甲基亚砜定容, 摇匀, 即得混合对照品贮备液。精密量取上述混合对照品贮备液5m L, 置于50 m L量瓶中, 加二甲基亚砜定容, 摇匀, 即得。

2.2.2 供试品溶液

精密称取样品0.9 g, 置于10 m L量瓶中, 加二甲基亚砜溶解并稀释至刻度, 摇匀, 即得。

2.2.3 空白对照溶液

取二甲基亚砜适量作为空白对照溶液。

2.3 系统适用性试验

精密量取“2.2”项下混合对照品溶液、供试品溶液和空白对照溶液各适量, 按“2.1”项下色谱条件进样测定, 记录色谱, 详见图1。由图1可知, 在该色谱条件下, 各成分均能达到基线分离, 分离度>1.5;理论板数以乙醇峰计为40 000, 保留时间为7.5 min。结果表明, 其他成分对测定无干扰。

图1 气相色谱图Fig 1 GC chromatograms

图1 气相色谱图Fig 1 GC chromatograms   下载原图

 

A.混合对照品;B.供试品;C.空白对照;1.二甲基亚砜;2.异丙苯;3.2-苯基-2-丙醇A.mixed control;B.test sample;C.blank control;1.dimethyl sulfoxide;2.cumene;3.2-phenyl-2-propanol

2.4 线性关系考察

精密量取“2.2.1”项下混合对照品贮备液0.5、1.0、2.5、5.0、7.5、10.0 m L, 分别置于50 m L量瓶中, 加二甲基亚砜定容, 摇匀, 即得系列混合对照品溶液。取上述系列混合对照品溶液适量, 按“2.1”项下色谱条件进样测定, 记录峰面积。以待测有机溶剂质量浓度 (x, μg/m L) 为横坐标、峰面积 (y) 为纵坐标进行线性回归, 回归方程与线性范围见表1。

表1 回归方程与线性范围Tab 1 Regression equations and linear ranges    下载原表

表1 回归方程与线性范围Tab 1 Regression equations and linear ranges

2.5 定量限 (LOQ) 与检测限 (LOD) 考察

取“2.2.1”项下混合对照品溶液适量, 倍比稀释, 按“2.1”项下色谱条件连续进样测定6次, 记录峰面积。当信噪比为10∶1时, 得LOQ;当信噪比为3∶1时, 得LOD。结果, 乙醇、乙酸乙酯、异丙苯、甲醇、甲苯、2-苯基-2-丙醇、二氯甲烷、乙腈的LOQ分别为4.5、3.0、1.4、2.7、0.6、3.0、3.9、2.8 ng;LOD分别为2.2、1.0、0.4、1.4、0.3、1.0、2.0、1.4 ng。

2.6 精密度试验

精密量取“2.2.1”项下混合对照品溶液1µL, 按“2.1”项下色谱条件连续进样测定6次, 记录峰面积。结果, 乙醇、乙酸乙酯、异丙苯、甲醇、甲苯、2-苯基-2-丙醇、二氯甲烷、乙腈峰面积的RSD分别为1.0%、1.0%、1.0%、1.0%、1.2%、1.0%、1.3%、1.4% (n=6) , 表明仪器精密度良好。

2.7 重复性试验

取样品 (批号:20160101) 适量, 共6份, 按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液, 再按“2.1”项下色谱条件进样测定, 记录峰面积并计算有机溶剂残留量。结果, 只检出乙醇、甲醇、甲苯, 其残留量的平均值分别为0.08%、0.06%、0.02%;RSD分别为1.8%、1.4%、1.5% (n=6) , 表明本方法重复性良好。

2.8 加样回收率试验

精密称取样品 (批号:20160101) 适量, 共9份, 每份约0.9 g, 分别置于10 m L量瓶中, 各加入低、中、高质量的待测有机溶剂对照品, 按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液, 再按“2.1”项下色谱条件进样测定, 记录峰面积并计算加样回收率, 结果见表2。

表2 加样回收率试验结果 (n=9) Tab 2 Results of recovery tests (n=9)    下载原表

表2 加样回收率试验结果 (n=9) Tab 2 Results of recovery tests (n=9)

表2 加样回收率试验结果 (n=9) Tab 2 Results of recovery tests (n=9)    下载原表

表2 加样回收率试验结果 (n=9) Tab 2 Results of recovery tests (n=9)

2.9 样品有机溶剂残留量测定

取3批样品各适量, 按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液, 再按“2.1”项下色谱条件进样测定, 记录峰面积并计算样品有机溶剂残留量, 结果见表3 (表中“-”表示未检出) 。

表3 样品有机溶剂残留量测定结果 (n=3, %) Tab 3 Results of residual organic solvents in samples (n=3, %)    下载原表

表3 样品有机溶剂残留量测定结果 (n=3, %) Tab 3 Results of residual organic solvents in samples (n=3, %)

3 讨论

3.1 色谱柱的选择

笔者尝试使用DB-WAX色谱柱进行试验, 结果乙醇与二氯甲烷不能有效分离, 调整升温程序及载气流速分离效果均不佳;后选用HP-1色谱柱, 结果乙醇与二氯甲烷分离度较好, 且其他有机溶剂均分离适宜, 因此选择HP-1为本试验的色谱柱。

3.2 氮气流速的选择

在方法优化过程中逐渐提升载气流速, 结果显示, 流速越高色谱峰越尖锐, 灵敏度也越高, 并且可缩短分析时间;但是流速过高, 柱压增加, 相邻溶剂峰分离度会变差, 综合考虑, 本试验选择氮气流速为4.0 m L/min。

3.3 进样口温度的选择

为了使样品更快更好地气化, 综合考虑样品对热稳定的特性、溶剂二甲基亚砜的沸点 (189℃) 以及待测有机溶剂的沸点, 最终本试验选择进样口温度为220℃。

3.4 稳定性试验

因供试品溶液浓度较高, 溶剂二甲基亚砜熔点低于20℃, 在低温环境下易结冰, 因此供试品溶液宜现配现用, 本文亦不做稳定性试验。

综上所述, 本方法灵敏度好, 操作简单, 适用于埃索美拉唑镁原料药中8种有机溶剂残留量的同时测定。